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超小型Cas12f1通过腺相关病毒传递实现高效的CRISPR编辑

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超小型Cas12f1通过腺相关病毒传递实现高效的CRISPR编辑

2021-9-5 20:43| 发布: |来自: 《自然—生物技术》

摘要: 韩国科学技术院Yong-Sam Kim团队利用超小型Cas12f1和经设计的引导RNA通过腺相关病毒传递实现高效的CRISPR编辑。相关论文于2021年9月2日在线发表于国际学术期刊《自然—生物技术》。研究人员重新设计了Un1Cas12f1的天 ...
韩国科学技术院Yong-Sam Kim团队利用超小型Cas12f1和经设计的引导RNA通过腺相关病毒传递实现高效的CRISPR编辑。相关论文于2021年9月2日在线发表于国际学术期刊《自然—生物技术》。

研究人员重新设计了Un1Cas12f1的天然引导RNA的五个部位:反式激活CRISPR RNA(tracrRNA)的5′末端、tracrRNA-crRNA互补区、一个五(尿苷酸)序列、crRNA的3′末端和tracrRNA中一个无序的茎2区。这些优化措施协同地使平均的插入缺失频率增加了867倍。优化后的Un1Cas12f1系统在通过质粒载体、PCR扩增子和腺相关病毒(AAV)传递时,能够在人类细胞中进行高效、特异的基因组编辑。由于Un1Cas12f1在原生质粒之外进行切割,它可以被用来有效地创建大的缺失。工程化的Un1Cas12f1系统显示出与SpCas9相当的效率和与AsCas12a相似的特异性。

据了解,基因治疗将受益于一个微型的CRISPR系统,它适合于小型AAV的基因组,并且在真核细胞中具有高切割活性和特异性。目前发现的最紧凑的CRISPR相关核酸酶之一是古细菌Un1Cas12f1。 然而,Un1Cas12f1及其变体在真核细胞中的活性非常低。
超小型Cas12f1通过腺相关病毒传递实现高效的CRISPR编辑  |  责任编辑:虫子

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