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【技术分享】fn-test多聚酶二抗放大系统

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[学术杂谈]

【技术分享】fn-test多聚酶二抗放大系统

 楼主| FineTest 发表于 2019-10-22 11:25  
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  过氧化物酶标记抗体(Ab)法于1968年引入。对于大多数临床和研究来说,是首个针对石蜡包埋的组织中抗体的实际应用(Nakane,1968)。然而基本上,传统的二抗(IgG)-HRP偶联物的限制为每个IgG分子连接不超过3个HRP分子,这种结合的摩尔比在常规免疫印迹或酶联免疫法中是足够的,但是可能缺乏检测低皮克级到飞克级含量目标的灵敏度,而无需使用其他放大信号的步骤,特别是免疫组织化学。

  在过去的几十年中,用于免疫组织化学的试剂和方法的改进导致检测系统的灵敏度提高。酶抗酶免疫复合技术(PAP和APAAP)(Sternberger等,1970)的抗原检测能力比标准抗生物素蛋白/链霉亲和素-生物素复合物(ABC或SABC)和标记的链霉生物素的抗原检测能力高几倍。标记的生物素(LSAB)方法可通过上世纪最后十年开发的链状聚合物共轭技术获得。

  然而,在水性环境中会形成巨大骨架结构的PAP和APAAP方法似乎会产生空间障碍,从而降低了检测试剂的穿透能力,特别是对于隐藏的核抗原。

  由于许多组织中所含的生物素(维生素H)已通过ABC(SABC)方法引入,因此可以与ABC(SABC)结合,从而产生非特异性染色。

  同时,为了减少实验步骤,增强信号,减少非特异性反应,Fine Biotech采用了新的聚合酶标记系统(包括聚HRP山羊抗兔IgG和聚HRP山羊抗小鼠IgG)。更多的酶将通过臂结构连接至单一抗体。同时,新系统的最佳结构增强了免疫化学过程中的信号,减少了实验步骤。

  不同检测系统的数据比较


  检测原理示意图


  IHC的检测结果
  对菲恩生物公司中高浓度的靶标(内参抗体)和低浓度的靶标两种抗体进行了检测。
  用的是菲恩生物公司的两种二抗:聚HRP山羊抗兔IgG(货号ES-0001)和聚HRP山羊抗小鼠IgG(货号ES-0002).
  DAB试剂盒来自于菲恩生物.(货号IHC0005)

  高水平靶标


  本试验免疫染色组织标本:人类肾脏(A,D,F,N),人肝癌(B,E),人乳腺癌(C,J,K),人结肠癌(H,I,L,M)大鼠心脏(G)。聚hrp山羊抗兔igG与1:100稀释聚hrp山羊抗鼠标igG与1:100稀释。

  阴性对照测试

  组织标本免疫染色阴性对照试验:大鼠心脏(1),人结肠肿瘤(2),大鼠肝脏(3),人乳腺肿瘤(4),血清为阴性一抗,聚hrp山羊抗兔igG和小鼠igG用1:50比例稀释混合。用DAB染色10分钟,细胞核用苏木精染色。

  结论:聚hrp偶联物具有优秀的信号放大性能,无非特异性结果,大大简化了实验操作过程。


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