过氧化物酶标记抗体（Ab）法于1968年引入。对于大多数临床和研究来说，是首个针对石蜡包埋的组织中抗体的实际应用（Nakane，1968）。然而基本上，传统的二抗（IgG）-HRP偶联物的限制为每个IgG分子连接不超过3个HRP分子，这种结合的摩尔比在常规免疫印迹或酶联免疫法中是足够的，但是可能缺乏检测低皮克级到飞克级含量目标的灵敏度，而无需使用其他放大信号的步骤，特别是免疫组织化学。
在过去的几十年中，用于免疫组织化学的试剂和方法的改进导致检测系统的灵敏度提高。酶抗酶免疫复合技术（PAP和APAAP）（Sternberger等，1970）的抗原检测能力比标准抗生物素蛋白/链霉亲和素-生物素复合物（ABC或SABC）和标记的链霉生物素的抗原检测能力高几倍。标记的生物素（LSAB）方法可通过上世纪最后十年开发的链状聚合物共轭技术获得。
然而，在水性环境中会形成巨大骨架结构的PAP和APAAP方法似乎会产生空间障碍，从而降低了检测试剂的穿透能力，特别是对于隐藏的核抗原。
由于许多组织中所含的生物素（维生素H）已通过ABC（SABC）方法引入，因此可以与ABC（SABC）结合，从而产生非特异性染色。
同时，为了减少实验步骤，增强信号，减少非特异性反应，Fine Biotech采用了新的聚合酶标记系统（包括聚HRP山羊抗兔IgG和聚HRP山羊抗小鼠IgG）。更多的酶将通过臂结构连接至单一抗体。同时，新系统的最佳结构增强了免疫化学过程中的信号，减少了实验步骤。
不同检测系统的数据比较
检测原理示意图
IHC的检测结果
对菲恩生物公司中高浓度的靶标(内参抗体)和低浓度的靶标两种抗体进行了检测。
用的是菲恩生物公司的两种二抗:聚HRP山羊抗兔IgG(货号ES-0001)和聚HRP山羊抗小鼠IgG(货号ES-0002).
DAB试剂盒来自于菲恩生物.(货号IHC0005)
高水平靶标
本试验免疫染色组织标本:人类肾脏(A,D,F,N)，人肝癌(B,E)，人乳腺癌(C,J,K)，人结肠癌(H,I,L,M)大鼠心脏(G)。聚hrp山羊抗兔igG与1:100稀释聚hrp山羊抗鼠标igG与1:100稀释。
阴性对照测试
组织标本免疫染色阴性对照试验:大鼠心脏(1)，人结肠肿瘤(2)，大鼠肝脏(3)，人乳腺肿瘤(4)，血清为阴性一抗，聚hrp山羊抗兔igG和小鼠igG用1:50比例稀释混合。用DAB染色10分钟，细胞核用苏木精染色。
结论:聚hrp偶联物具有优秀的信号放大性能，无非特异性结果，大大简化了实验操作过程。
【技术分享】fn-test多聚酶二抗放大系统 |
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