CELL RES ：万建民院士丨钙离子启动免疫系统的分子机制（附NMT实验体系）

期刊：cell research

主题：钙离子启动免疫系统的分子机制

标题：A cyclic nucleotide-gated channel mediates cytoplasmic calcium elevation and disease resistance in rice

影响因子：17.848

检测指标：Ca2+流速

检测部位：水稻叶肉细胞

Ca2+流速流实验处理方法：

水稻幼苗，10uM chitin或10uM flg22肽瞬时胁迫

Ca2+流速流实验测试液成份：

0.2mM CaCl2, 0.1mM NaCl, 0.1mM MgCl2 and 0.1mM KCl,pH 5.2

作者：中国农科院万建民、王家昌

The transient elevation of cytoplasmic calcium is  essential for pathogen-associated molecular pattern (PAMP)-triggered  immunity (PTI). However, the calcium channels responsible for this  process have remained unknown.

Here, we show that rice CDS1 (CELL  DEATH and SUSCEPTIBLE to BLAST 1) encoding OsCNGC9, a cyclic  nucleotide-gated channel protein, positively regulates the resistance to  rice blast disease. We show that OsCNGC9 mediates PAMP-induced Ca2+  influx and that this event is critical for PAMPs-triggered ROS burst and  induction of PTI-related defense gene expression. We further show that a  PTI-related receptor-like cytoplasmic kinase OsRLCK185 physically  interacts with and phosphorylates OsCNGC9 to activate its channel  activity.

Our results suggest a signaling cascade linking pattern  recognition to calcium channel activation, which is required for  initiation of PTI and disease resistance in rice.

细胞质钙的瞬时升高对病原体相关分子模式（PAMP）- 触发免疫（PTI）至关重要。然而，负责该过程的钙通道仍然未知。

在这里，我们显示编码OsCNGC9（环核苷酸门控通道蛋白）的水稻CDS1（CELL  DEATH和SUSCEPTIBLE to BLAST  1）正向调节对稻瘟病的抗性。我们显示OsCNGC9介导PAMP诱导的Ca2+内流，并且该事件对于PAMPs触发的ROS爆发和诱导PTI相关的防御基因表达是至关重要的。我们进一步显示PTI相关受体样细胞质激酶OsRLCK185与OsCNGC9物理相互作用并使其磷酸化以激活其通道活性。

我们的研究结果表明信号级联将模式识别与钙通道激活联系起来，这是启动水稻PTI和抗病性所必需的。

结果表明：响应于几丁质或flg22刺激，WT叶肉细胞比cds1叶肉细胞表现出强烈且快速的Ca2+流入（图3a，b和补充信息，图S6）。这些结果表明OsCNGC9可以介导水稻PTI中的Ca2+流入，并且这种能力在cds1突变体中受损。

结果表明：响应几丁质刺激，Nipponbare叶肉细胞比Osrlck185/  55双突变体叶肉细胞，表现出快速的Ca2+内流（图e）。此外，在几丁质处理Oscerk1敲除突变体后未观察到显着的Ca2+流入（图f）。这些结果共同表明OsRLCK185及其紧密同源物OsRLCK55参与水稻抗稻瘟病和PAMP诱导的Ca2+内流的调节。

​结果表明：在PAMPs刺激后，与Kitaake植物相比，OsCNGC9-OE转基因植物的叶肉细胞显示出更强的Ca2+流入。结合其他实验表明，OsCNGC9是水稻PTI的限速正调控因子。