细胞成团和细胞出芽实验

一.实验原理

二.实验材料

三.成团实验步骤

● 配置1.5%琼脂糖，保持配好的琼脂糖为液体状态

● 96孔板每孔添加50μl配置好的1.5%琼脂糖，室温静置20分钟，待琼脂糖完全冷却固化。50μl琼脂糖能刚好覆盖96孔板单孔的底部，并且形成凹液面。

● 在96孔板的孔间加入无菌PBS，保证实验的湿度

● 按照日常方法准备细胞悬液

● 根据试验设计确定单孔需加入的细胞个数，本例中，每孔加入500个细胞

● 加入50-100μl的稀释好的细胞悬液，保证每孔总液体体积（包括琼脂糖）不超过200μl，每孔细胞数500个

● 培养箱中培养

● 每天都要换液，注意在细胞成团过程中不能剧烈晃动培养板

● 可以用相差显微镜观察细胞成团情况（图一）。

1.准备基质胶

● 实验前一天将Matrigel置于冰盒中，放入4。C冰箱，使胶能过夜缓慢融化。（注意：同样要准备一些4。C预冷的枪头用于吸取Matrigel）

● 开始实验前，将Matrigel始终保持放在冰盒中。

● 打开灭菌包装，取出ibidi血光生成载玻片 μ-Slide Angiogenesis。

● 每孔中加入10μl Matrigel。注意枪头要垂直于内孔的正上方加入Matrigel，防止有Matrigel流经上孔而留下残留胶。

● 盖上ibidi血管生成载玻片的盖子。

● 准备一个10cm的培养皿，放入浸过水的纸巾，制成一个湿盒。

● 将ibidi血管生成载玻片放入培养皿中，盖上培养皿盖。

● 将整个培养皿放入培养箱中，静置30分钟左右，等待胶凝结。

● 将形成的细胞团吸出，置于凝固的胶平面上

● 培养并使用显微镜采集出芽图像

● 采用图像分析软件采集细胞团面积，出芽覆盖面积，出芽个数以及总出芽长度等数据。