如何设计引物

光辉岁月 · 发表于 2016-7-15 11:00

各位大神，你们好，小弟我刚刚接触分子生物学实验，有很多不懂的地方，还得请教各位大神，能不能帮我设计一下引物。
cDNA模板是通过RNA反转录合成的。之前师兄设计的引物没扩出来，引物为：FP-CTCCCGTCCAACGGAACTAACC Tm=63.8；RP-CGACCACGATCTCAACAACAAACA Tm=60.3
cDNA序列：CTCCGCATTCGTGGCCATCCATCCTCCCGTCCAACGGAACTAACCCCCTTCTCCTTCCCC
CGGCGGCCAGCTTCCCCTACCAACCCTTCCCGCCTACATATACCGTCCCCCACATCCATA
CCACCACACCACACGACACCACCATCTGTACTCATTCAGCTGCCTCCGGCAAACTTAGAC
GTCACACGGATCCCCCATCTCGCAGCCAACCTAGTCGGCCGCTGGTACGTACTGAGAGTT
CAATGGCGGCGACGATGACGGTGGAGGAGGTGAGGAAGGCGCAGCGGGCGGAGGGGCCGG
CCACGGTGCTGGCGATCGGCACGGCGACCCCGGCGAACTGCGTGTATCAGGCCGACTACC
CGGACTACTACTTCAAGGTCACCAAGAGCGACCACATGGCCGACCTCAAGGAGAAGTTCA
AGAGGATGTGTGACAAATCGCAGATCAGGAAGAGGTACATGCACCTAACGGAGGAGATCC
TACAGGAAAACCCCAACATGTGCGCCTACATGGCGCCGTCTCTGGACGCGCGCCAGGATA
TTGTGGTTGTCGAGGTCCCGAAGCTCGGGAAGGCGGCGGCGCAAAAGGCGATCAAGGAGT
GGGGACAGCCACGGTCTAAGATCACCCACCTCGTCTTCTGCACCACCTCCGGTGTGGATA
TGCCGGGGGCCGACTACCAGCTGACCAAGATGCTCGGTCTTCGCCCGTCCGTGAAGCGCC
TCATGATGTATCAACAGGGATGCTTCGCCGGCGGGACGGTGCTTCGCCTAGCCAAAGACC
TTGCTGAGAACAACCGAGGCGCGCGCGTGCTCGTGGTCTGCTCGGAGATCACCGCGGTGA
CCTTCCGTGGCCCGCACGAGTCCCACCTCGACTCACTCGTGGGTCAGGCGCTCTTTGGTG
ATGGTGCAGCCGCGGTGATCATCGGTGCAGACCCCGACGTGTCCGTCGAGCGCCCCCTAT
TCCAGCTGGTATCTGCGAGCCAGACGATTCTGCCAGACTCAGAGGGTGCCATCGACGGCC
ACCTCCGGGAGGTCGGCCTCACCTTCCACCTCCTCAAGGATGTGCCTGGGCTCATCTCCA
AGAACATCGAGCGCGCCCTAGAGGACGCCTTCAAGCCATTGGGTATCGATGATTGGAACT
CCGTCTTCTGGATAGCGCACCCCGGCGGGCCAGCAATCCTTGACATGGTTGAGGCCAAGG
TAAACCTCAACAAGGAACGGATGCGCGCCACCAGGCATGTCCTCTCCGAATATGGCAACA
TGTCAAGCGCATGCGTTCTCTTCATCATGGACGAAATGCGCAAACGGTCCGCTGAGGATG
GGCACACCACAACCGGAGAGGGAATGGACTGGGGAGTTCTATTCGGCTTTGGTCCCGGCC
TCACCGTCGAGACGGTCGTCCTCCATAGCGTCCCCGTCACTGCCTAGGTATGTCAATATG
AAGAAGAAAAATCGTTCAAAG

cds序列：ATGGCGGCGACGATGACGGTGGAGGAGGTGAGGAAGGCGCAGCGGGCGGAGGGGCCGGCC
ACGGTGCTGGCGATCGGCACGGCGACCCCGGCGAACTGCGTGTATCAGGCCGACTACCCG
GACTACTACTTCAAGGTCACCAAGAGCGACCACATGGCCGACCTCAAGGAGAAGTTCAAG
AGGATGTGTGACAAATCGCAGATCAGGAAGAGGTACATGCACCTAACGGAGGAGATCCTA
CAGGAAAACCCCAACATGTGCGCCTACATGGCGCCGTCTCTGGACGCGCGCCAGGATATT
GTGGTTGTCGAGGTCCCGAAGCTCGGGAAGGCGGCGGCGCAAAAGGCGATCAAGGAGTGG
GGACAGCCACGGTCTAAGATCACCCACCTCGTCTTCTGCACCACCTCCGGTGTGGATATG
CCGGGGGCCGACTACCAGCTGACCAAGATGCTCGGTCTTCGCCCGTCCGTGAAGCGCCTC
ATGATGTATCAACAGGGATGCTTCGCCGGCGGGACGGTGCTTCGCCTAGCCAAAGACCTT
GCTGAGAACAACCGAGGCGCGCGCGTGCTCGTGGTCTGCTCGGAGATCACCGCGGTGACC
TTCCGTGGCCCGCACGAGTCCCACCTCGACTCACTCGTGGGTCAGGCGCTCTTTGGTGAT
GGTGCAGCCGCGGTGATCATCGGTGCAGACCCCGACGTGTCCGTCGAGCGCCCCCTATTC
CAGCTGGTATCTGCGAGCCAGACGATTCTGCCAGACTCAGAGGGTGCCATCGACGGCCAC
CTCCGGGAGGTCGGCCTCACCTTCCACCTCCTCAAGGATGTGCCTGGGCTCATCTCCAAG
AACATCGAGCGCGCCCTAGAGGACGCCTTCAAGCCATTGGGTATCGATGATTGGAACTCC
GTCTTCTGGATAGCGCACCCCGGCGGGCCAGCAATCCTTGACATGGTTGAGGCCAAGGTA
AACCTCAACAAGGAACGGATGCGCGCCACCAGGCATGTCCTCTCCGAATATGGCAACATG
TCAAGCGCATGCGTTCTCTTCATCATGGACGAAATGCGCAAACGGTCCGCTGAGGATGGG
CACACCACAACCGGAGAGGGAATGGACTGGGGAGTTCTATTCGGCTTTGGTCCCGGCCTC
ACCGTCGAGACGGTCGTCCTCCATAGCGTCCCCGTCACTGCCTAG
之前设计引物跑出来的胶如下（温度梯度为：52、54、56、58、60、62），什么都没跑出来，估计是引物设计有问题，cDNA质量没问题，在其他基因中能够克隆出来。劳烦各位大神帮帮忙，不胜感激。

如何设计引物

虫子 · 发表于 2016-7-15 11:58

生物高手啊，没看懂

光辉岁月 · 发表于 2016-7-15 14:57

一只虫子发表于 2016-7-15 11:58
生物高手啊，没看懂

就是帮帮忙重新设计一下引物

cristy5201 · 发表于 2016-9-29 09:42

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feiyang · 发表于 2016-9-29 10:03

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王朝生 · 发表于 2016-9-29 12:07

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Captain.TT · 发表于 2016-9-29 15:23

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招财喵了个咪 · 发表于 2016-9-29 16:04

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FenGShao24 · 发表于 2016-9-29 16:35

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祁山龙 · 发表于 2016-9-29 19:52

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艾薇儿 · 发表于 2016-9-29 20:30

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Edison_yu · 发表于 2016-9-29 21:06

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虚心学习 · 发表于 2016-9-30 05:42

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AE筱溪 · 发表于 2016-9-30 14:54

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男人、必自强 · 发表于 2016-9-30 15:05

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